ELISA de TSH (ultrasensible)

Un inmunoensayo enzimático para la determinación cuantitativa ultrasensible de la hormona estimulante de la tiroides (U-TSH) en suero. La determinación de los niveles séricos o plasmáticos de la hormona estimulante de la tiroides (TSH o tirotropina) se reconoce como una medida importante en la evaluación de la función tiroidea.1 La hormona estimulante de la tiroides es secretada por el lóbulo anterior de la glándula pituitaria e induce la producción y liberación de de tiroxina (T4) y triyodotironina (T3) de la glándula tiroides.2 Es una glicoproteína con un peso molecular de aproximadamente 28.000 daltons, que consta de dos subunidades químicamente diferentes, alfa y beta.3 Aunque la concentración de TSH en sangre es extremadamente bajo, es esencial para el mantenimiento de la función tiroidea normal. La liberación de TSH está regulada por una hormona liberadora de TSH (TRH) producida por el hipotálamo. Los niveles de TSH y TRH están inversamente relacionados con el nivel de hormona tiroidea. Cuando hay un nivel alto de hormona tiroidea en la sangre, el hipotálamo libera menos TRH, por lo que la pituitaria secreta menos TSH. La acción opuesta ocurrirá cuando haya niveles reducidos de hormonas tiroideas en la sangre. Este proceso, conocido como mecanismo de retroalimentación negativa, es responsable de mantener los niveles sanguíneos adecuados de estas hormonas.4,5 Los análisis de TSH convencionales se aceptan generalmente como una herramienta importante en el diagnóstico del hipotiroidismo primario y secundario1, pero ofrecen una utilidad clínica limitada en la evaluación del hipertiroidismo (tiroides hiperactiva) debido a una falta de sensibilidad. El ELISA de TSH ultrasensible (U-TSH) ofrece una sensibilidad de 0,05 µUI/mL y, por lo tanto, permite la discriminación entre poblaciones de pacientes hipertiroideos y normales. El ensayo está destinado a medir cuantitativamente la TSH en suero humano con sensibilidad de segunda generación. El U-TSH ELISA se puede utilizar como ayuda en la evaluación del estado de la tiroides y en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades de la tiroides. La prueba ELISA de TSH ultrasensible se basa en el principio de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas en fase sólida.6,7 El sistema de ensayo utiliza un anticuerpo monoclonal único dirigido contra un determinante antigénico distinto en la molécula de TSH intacta. El anticuerpo monoclonal de ratón anti-TSH se utiliza para la inmovilización en fase sólida (pocillos de microtitulación) y el anticuerpo anti-TSH de cabra se utiliza en la solución de conjugado anticuerpo-enzima (peroxidasa de rábano picante). Se deja que la muestra de prueba reaccione simultáneamente con los anticuerpos, lo que da como resultado que la molécula de TSH quede intercalada entre la fase sólida y los anticuerpos unidos a enzimas. Después de una incubación de 2 horas a temperatura ambiente con agitación, la fase sólida se lava con agua destilada para eliminar los anticuerpos marcados no unidos. Se añade una solución de tetrametilbencidina (TMB) y se incuba durante 20 minutos, lo que produce el desarrollo de un color azul. El desarrollo del color se detiene con la adición de HCl 1 N y el color amarillo resultante se mide espectrofotométricamente a 450 nm.La concentración de TSH es directamente proporcional a la intensidad del color de la muestra de prueba.