ELISA antiperoxidasa antitiroidea (anti-TPO)

Determinación cuantitativa de autoanticuerpos de peroxidasa tiroidea (TPO) en suero o plasma humano mediante un inmunoensayo enzimático en microplaca. Las mediciones de los autoanticuerpos TPO pueden ayudar en el diagnóstico de ciertas enfermedades de la tiroides, como las de Hashimoto y Grave, así como el bocio no tóxico. Se ha demostrado que los anticuerpos contra la peroxidasa tiroidea están presentes de manera característica en pacientes con tiroiditis de Hashimoto (95%), mieledema idiopático (90%) y enfermedad de Graves (80%)1. De hecho, el 72% de los pacientes positivos para anti-TPO presentan algún grado de disfunción tiroidea. Esto ha llevado a que la medición clínica se convierta en una herramienta valiosa en el diagnóstico de la disfunción tiroidea. En el pasado, las mediciones de anticuerpos contra la TPO se realizaban mediante hemaglutinación pasiva (PHA). Las pruebas de PHA no tienen la sensibilidad del inmunoensayo enzimático y están limitadas por la interpretación subjetiva. Este procedimiento, con la sensibilidad mejorada de la EIA, permite la detectabilidad de niveles subclínicos de anticuerpos contra TPO. Además, los resultados se cuantifican mediante un espectrofotómetro, lo que elimina la interpretación subjetiva. La metodología del inmunoensayo enzimático en microplacas proporciona al técnico una sensibilidad óptima y requiere pocas manipulaciones técnicas. En este método, primero se añade suero de referencia, muestra de paciente diluida o control a un pocillo de microplaca. Se añade antígeno de peroxidasa tiroidea biotinilada (TPO) y luego se mezclan los reactivos. La reacción resulta entre los autoanticuerpos contra TPO y la TPO biotinilada para formar un complejo inmunológico, que se deposita en la superficie de los pocillos recubiertos con estreptavidina a través de la reacción de alta afinidad de la biotina y la estreptavidina. Una vez completado el período de incubación requerido, la aspiración o decantación separa los reactivos que no están adheridos a los pocillos. Luego se agrega un conjugado de enzima anti-IgG humana para permitir la cuantificación de la reacción mediante la interacción con la IgG humana del complejo inmunológico. Después del lavado, la actividad enzimática se determina mediante la reacción con el sustrato para producir color. El empleo de varias referencias séricas de actividad de anticuerpos conocida permite la construcción de un gráfico de actividades enzimáticas y de anticuerpos. A partir de la comparación con la curva de respuesta a la dosis, la actividad enzimática de una muestra desconocida se puede correlacionar con el nivel de anticuerpos autoinmunes.