Inmunoglobulin E (IGE) Elisa

La prueba cuantitativa DRG IgE es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) en fase sólida basado en el principio de sándwich.13,14 La muestra de prueba (suero) se agrega a los anticuerpos monoclonales IgE inmovilizados en pocillos de microtitulación de poliestireno (fase sólida) y con el búfer cero. Si la IgE humana está presente en la muestra, se combinará con los anticuerpos del pocillo. A continuación, se lava el pocillo para eliminar cualquier muestra de prueba residual y se añade el reactivo conjugado de anti IgE de cabra en la enzima del anticuerpo (peroxidasa de rábano picante). El reactivo conjugado se unirá inmunológicamente a la IgE en el pocillo, lo que dará como resultado que las moléculas de IgE queden intercaladas entre la fase sólida y los anticuerpos ligados a enzimas.
Después de la incubación a temperatura ambiente, la fase sólida se lava con agua para eliminar el anticuerpo marcado no unido. Seagrega una solución de 3,3',5,5' Tetrametilbencidina (TMB) y se incuba durante 20 minutos, lo que da como resultado el desarrollo de un color azul. El desarrollo del color se detiene y el color amarillo resultante se mide espectrofotométricamente a 450 nm. La concentración de IgE es directamente proporcional a la intensidad del color de la muestra de prueba.