Durante la primera incubación, de estradiol de la muestra añadida compite con el conjugado enzimático añadido, que es estradiol conjugado con peroxidasa de rábano picante, para unirse al anticuerpo recubierto. Después de un paso de lavado para eliminar las suscancias no unidas, la fase sólida se incuba con la solución de sustrato. La reacción colorimétrica se detiene mediante la adición de solución de parada. La intensidad del color es inversamente proporcional a la concentración del analito en la muestra.

El inmunoensayo DRG ACTH es un ELISA [ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas] de dos sitios para la medici6n de la cadena de 39 aminoacidos biol6gicamente activa de ACTH. anticuerpo policlonal de cabra contra la ACTH humana, purificado por cromatografia de afinidad, y un anticuerpo monoclonal de rat6n contra la ACTH humana son especfficos para regiones bien definidas en la molecula de ACTH.
En este ensayo, los calibradores, los controles o las muestras de pacientes se incuban simultaneamente con el anticuerpo marcado con enzima y un anticuerpo acoplado con biotina en un pocillo de microplaca recubierto con estreptavidina. Al final de la incubaci6n del ensayo, el micropocillo se lava para eliminar los componentes no unidos y la enzima unida a la fase s6Iida se incuba con el sustrato, tetrametilbencidina (TMB). Luego se agrega una soluci6n de parada acida para detener la reacci6n y convertir el color a amarillo. La intensidad del color amarillo es directamente proporcional a la concentraci6n de ACTH en la muestra.